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凝膠色譜柱使用注意事項

點擊次數(shù):1281 發(fā)布時間:2017-08-16
   凝膠色譜柱使用注意事項
  使用凝膠色譜系統(tǒng)的一些注意事項:
  溶劑準備:使用HPLC純?nèi)軇?,如有必要,進行過濾。溶劑的相溶性,避免使用對不銹鋼有腐蝕性的溶劑。
  溶劑脫氣:聲脫氣。
  樣品準備:過濾樣品,確保樣品中不含固體顆粒,用流動相溶解樣品。
  色譜柱的保護:
  (1)防止氣體進入色譜柱。凝膠柱是不允許氣泡進入的,否則將會使柱效降低甚至形成微小的難以驅(qū)除的氣室。因此,為了防止氣泡進入色譜柱,一定要使用經(jīng)過脫氣的流動相,并且要嚴格按照下列步驟來安裝色譜柱:
  a.拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲,觀察是否有溶劑滲出;
  b.如有溶劑滲出,即可將色譜柱接到管路上,以避免氣泡的進入;
  c.如無溶劑滲出時,表明色譜柱的此端已經(jīng)進去空氣了,此時,可將色譜柱的出口端接到進樣閥上,以流動相來反方向沖洗色譜柱,以便將柱內(nèi)的空氣排除。以0.2ml/min的小流量來沖色譜柱,如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會導(dǎo)致柱性能的降低;
  d.如果流出的溶劑里不含有氣泡,說明柱內(nèi)的氣體已經(jīng)被排出了,再將色譜柱以正確的方向接好,這樣氣泡就進不到色譜柱里面了。
  (2)色譜柱的清洗。為了不使被測物質(zhì)和雜質(zhì)停留在色譜柱中,在每次的樣品分析工作完成之后,都應(yīng)及時地清洗色譜柱。首要用對被測樣品洗脫能力的溶劑來洗脫色譜柱,以分析工作中常用的反相色譜分析法為例,因其流出的物質(zhì)是性大的物質(zhì),此時應(yīng)用100%的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等性稍弱的溶劑將吸附在柱內(nèi)的性小的物質(zhì)洗脫下來,洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動相是緩沖溶液,則應(yīng)用蒸餾水來沖洗色譜柱,以沖掉柱內(nèi)的鹽,然后再用合適的溶劑來沖洗。
  凝膠濾過色譜法(Gel Filtration Chromatography)中所使用的凝膠柱常用緩沖溶液做流動相,用完之后當(dāng)然要用蒸餾水來沖洗。如果是連續(xù)操作,可以將緩沖溶液置于柱內(nèi)過夜,但是維持小流速(<0.5ml/min)以防止緩沖鹽的析出,如果流動相中含有鹵化物,即使是停一夜,也必須要用蒸餾水將色譜柱沖洗干凈,以防止它們對柱體的腐蝕。
  (3)色譜柱的存放。如果色譜柱暫時不用,存放時要注意以下幾點:
  a.幾天之內(nèi)的短期放置,凝膠柱則用蒸餾水來沖洗,再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。
  b.如果色譜柱長期不用,僅用上述方法來處理就不行了,這時應(yīng)使用色譜柱使用說明書中所指明的溶劑來充滿色譜柱,凝膠柱則不能用水了,因柱內(nèi)如果有微生物的生長則會使柱效降低,此時應(yīng)用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來沖洗色譜柱,再將色譜柱封嚴。色譜柱長期放置時,一定要將色譜柱的兩端封嚴,以防止由于溶劑揮發(fā)而造成的柱填料干縮現(xiàn)象,因這可導(dǎo)致柱效的嚴重降低。
  c.色譜柱應(yīng)貯存在室溫下,如果放置于0℃以下的環(huán)境里,柱內(nèi)就會結(jié)冰,這也將導(dǎo)致柱效的降低。
  (4)不要溫使用。
  (5)不要壓沖洗柱子
  對儀器的維護和保養(yǎng)進行記錄。

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